產品類別：造血干細胞的分離
 
產品編號：LGS1068CB05
 
產品名稱：人臍帶血干細胞分離液KIT醫用級
 
產品規格：200ml/KIT
 
產品價格：￥1800.00元

人臍帶血干細胞分離液KIT說明書
 
【產品簡介】
 
臍帶血收集采用自然放血且從產房采集到細胞分離時長一般大于 2 小時，與外周血靜脈采血且及時分離相比會影響分離效果，為此，灝洋優化配方以提高臍帶血干細胞分離得率，請廣大醫療及科研用戶使用并提出寶貴意見。
 
【包裝規格】
 

	名稱	產品編號	規格
A	人臍帶血干細胞分離液	LGS1068CB-200	200ml
B	紅細胞沉降液（贈品）	HES-TBD550	200ml
C	清洗液（贈品）	2010X1118-100	200ml
D	說明書		1 份

 
【實驗前準備】
 
適用儀器：最大離心力可達 1200g 的水平轉子離心機
 
【檢驗方法】
 
全過程樣本、試劑及實驗環境均需在 20±2℃的條件下進行。
 
方法一：
 

• 新鮮抗凝臍血與生理鹽水及紅細胞沉降液（6%羥乙基淀粉）按 1：1：1 的比例混合，自然沉降 30min（具體沉降時間應根據不同樣本對應調整以保證沉降效果）。
• 沉降后取上層液體，300g 離心 15min，棄去 50%上清，以剩余 50%上清重懸沉淀，制成細胞懸液。

 

• 取 50mLPBMC 高效離心管，加入 15ml 分離液，200g 離心 1min 將分離液全部離心至隔片以下，傾去隔片上殘留的分離液。

 

• 將細胞懸液加至隔片上，400-500g，離心 20-30min。

 

• 離心后取白色環狀目的細胞層，清洗后重懸備用。

 
方法二：
 

• 新鮮抗凝臍血與紅細胞沉降液（6%羥乙基淀粉）按 1：1 的比例混合。

 

• 取 50mLPBMC 高效離心管，加入 15ml 分離液，200g 離心 1min 將分離液全部離心至隔片以下，傾去隔片上殘留的分離液。

 

• 將與沉降液混勻的樣本加至隔片上，400-500g，離心 25min。

 

• 離心后取白色環狀目的細胞層，清洗后重懸備用。

 
【注意事項】
 
1. 全過程樣本、試劑及實驗環境均需在 20±2℃的條件下進行。為獲得最佳的實驗結果，
 
最好在取血 2h 內進行實驗，血液存放時間越長，細胞分離效果越差。血液放置超過 6h后分離效果更差甚至不能達到分離目的。
 

• 本實驗最好不要使用高聚合材質（如聚苯乙烯）的塑料制品，應使用無靜電、低靜電離心管及未經堿處理過后的玻璃制品，因為靜電作用將導致細胞貼壁、堿處理的玻璃表面會變成毛面，影響細胞分離效果。

 

• 如實驗后細胞得率或活性過低，請聯系技術支持以尋求幫助。

 
【儲存條件及有效期】
 
常溫保存，有效期 2 年。本品易感染細菌，需無菌條件操作。無菌條件下操作，啟
 
封后置常溫保存。如 4℃保存，本分離液易出現白色結晶，影響分離效果。
 
【參考值（參考范圍）】
 
本實驗干細胞提取率及純度均大于 80%。
 
下表為成年人外周血中各種細胞的數量及比例，用戶可適當進行參考。
 

	紅細胞		白細胞		血小板
		（4.0-10.0）×109
	（4.0-5.5）×1012				（1.0-3.0）×1011
含量（個/L）		中性粒細胞	淋巴細胞	單核細胞
		50%-70%	20%-40%	3%-8%
【相關實驗技術方案】

 

• 所獲得干細胞的培養技術。

 

• 所獲得干細胞的核酸提取技術。

 

• 所獲得干細胞的鑒定方法A.流式細胞技術B.免疫組化技術C.原位雜交技術

 
D.PCR 技術
 
 
【可能存在的問題及解決方法】
 
1.  由于血液粘度、細胞密度等差異可能造成的問題及解決方案如下表所示：
 
 

	出現情況	出現原因	建議解決方案
	離心后目的細胞存在于血漿層或稀釋液層	轉速過小或離心時間過短	適當增減轉速
	離心后目的細胞存在于分離液中	轉速過大或離心時間過長
	離心后白環層彌散	細胞密度過大	調整細胞密度
	離心后白環層太淺或看不見	細胞密度過小

 

• 本分離液分離細胞的原理為密度梯度離心，其密度與溫度、大氣壓等密切相關。不同地區客戶可根據當地情況對離心條件進行適當調整。建議對離心條件進行調整時，恒定離心時間，對離心轉速進行調整。

 

• 本分離液依照國際標準，全部使用藥用級原料，性能指標與國產同類產品略有不同，可

 
能出現紅細胞沉降不完全的情況，可以適當加大離心轉速。
 
注：在對離心條件進行調整時，離心轉速的加減以 50-100g 為基數，直至達到最佳分離效果，離心力最小不得小于 400g，最大不得大于 1200g。離心時間以 20-30min 為準。